Уникальные методики, разработанные и апробированные специалистами КриоЦентра, позволяют сохранять два вида биологического материала, получаемого из ткани пупочного канатика:
- выделенные и детально охарактеризованные мезенхимальные (стромальные) стволовые клетки (МСК) , которые при необходимости можно дополнительно размножать для последующего использования (помимо прочего, это подтверждает, что перед замораживанием исходная ткань пупочного канатика содержала МСК в достаточном количестве и с высокой жизнеспособностью);
- собственно ткань пупочного канатика, которую, по истечении многих лет можно будет разморозить и использовать для выделения клеток в условиях, на то время оптимальных.
Оба метода показали высокую эффективность, а их результаты (вместе с другими) опубликованы на страницах научных изданий.
- Заготовка ткани пупочного канатика
- Подготовка ткани пупочного канатика к криогенному хранению
- Выделение мезенхимальных стромальных клеток
- Уникальный лабораторный комплекс
- Фенотипирование
- Криогенное хранение
Заготовка ткани пупочного канатика
Сразу после заготовки пуповинной крови на среднюю часть пуповины накладывают два дополнительных зажима-клипсы для предупреждения инфицирования. Фрагмент пупочного канатика длиной 10-15 см с наложенными зажимами иссекают и помещают в герметичный транспортный контейнер. Контейнер маркируется тем же уникальным кодом, что и заготовленная пуповинная кровь, и транспортируется в лабораторию КриоЦентра в изотермических условиях.
Подготовка ткани пупочного канатика к криогенному хранению
В стерильных условиях полученный пупочный канатик обрабатывается дезинфицирующим раствором, и из него вырезается фрагмент длиной 5-6 см. С помощью стерильного инструмента нарезаются кусочки размером около 1-2 мм (примерно с просяное зернышко), которые отмывают от остатков крови стерильным физиологическим раствором. Полученный материал распределяют в заранее промаркированные стерильные криопробирки и добавляют раствор криопротектора, аналогичный используемому для криоконсервации клеток пуповинной крови. Процесс программного замораживания ткани пупочного канатика и все последующие процедуры не отличаются от протоколов замораживания клеток пуповинной крови.
Выделение мезенхимальных стромальных клеток
Внутри ткани пупочного канатика МСК окружены плотным внеклеточным веществом (матриксом). Для их выделения используют раствор специального фермента. Затем полученную суспензию клеток отмывают, разводят в специальной питательной среде, высевают в стерильные культуральные флаконы и помещают в инкубатор, поддерживающий необходимую температуру, газовый состав и влажность. Примерно через 2-3 недели, когда клетки успевают размножиться до определенного количества, их пересевают в новые флаконы: часть их них будет использована для проведения необходимых тестов (в том числе, фенотипирования); клетки, растущие на других флаконах, предназначены для последующего хранения. Примерно еще через 2 недели клетки снимают с поверхности флаконов, переносят в криопробирки и замораживают. По результатам проведенных исследований (число клеток, жизнеспособность, посев на стерильность, фенотип) на каждый образец выдается Паспорт.
Уникальный лабораторный комплекс
Все процедуры по выделению, культивированию и подготовке к криогенному хранению клеток и ткани пупочного канатика проводятся квалифицированными специалистами (клеточными биологами) с многолетним опытом работы в сертифицированной (чистые помещения, ГОСТ Р ИСО 14644) лаборатории, оснащенной по последнему слову техники. Лаборатория расположена в изолированном секторе на территории основного производственного комплекса КриоЦентра и использует все его существующие технологические мощности (аналитическая лаборатория, программное замораживание, криогенное хранилище, лаборатория проточной цитометрии, электронная база данных и т.п.).
Фенотипирование
Фенотипирование – методический прием, позволяющий сделать портрет даже одиночной клетки на основании выявления на ее поверхности специфических маркеров – белков, ответственных за выполнение той или иной функции. Как и в случае фенотипирования клеток пуповинной крови, исследование МСК проводится с помощью специального прибора – проточного цитофлуориметра, позволяющего охарактеризовать клетки по 5 – 7 параметрам.
Криогенное хранение
Пробирки с фрагментами ткани пупочного канатика и выделенными из нее клетками хранятся в тех же условиях, что и клетки пуповинной крови – в современных криогенных хранилищах, оснащенных датчиками температуры и уровня жидкого азота. Срок хранения биологического материала исчисляется десятилетиями и практически не ограничен.
Опыт, проверенный годами
КриоЦентр работает в тесном контакте со многими исследовательскими лабораториями и институтами. Среди них – Научно-практическая лаборатория стволовых клеток человека ФГБУ «НМИЦ Кардиологии МЗ РФ» – именно ее сотрудниками в 2003 г. впервые в мире было описано присутствие в ткани пупочного канатика «МСК-подобных» (MSC-like) клеток, разработан способ выделения, и дана их характеристика. В последующие годы сотрудниками лаборатории и КриоЦентра были опубликованы десятки совместных научных работ и докладов, посвященных биологии стволовых клеток и их практическому применению.
